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雌激素試劑盒
雌激素試劑盒
更新時間:2018-02-01
訪問量: 375
廠商性質: 生產廠家

人雌激素(E)ELISA試劑盒--打折銷售中,谘詢! 【質量承諾】: 非人為造成的產品質量問題,視具體情況,我司負責退貨換貨。

雌激素試劑盒產品概述:

雌激素(E)ELISA試劑盒說明書

本試劑僅供研究使用       目的:本試劑盒用於測定人血清,血漿及相關液體樣本中雌激素(E含量。

實驗原理:

    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雌激素(E水平。用純化的雌激素(E抗體包被微孔板,製成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入雌激素(E,再與HRP標記的雌激素(E抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體複合物,經過徹底洗滌後加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雌激素(E呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中雌激素(E濃度。

試劑盒組成

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標準品:72pmol/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

標準品稀釋液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃保存

酶標試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

20倍濃縮洗滌液

20ml×1

30ml×1

2-8℃保存

 

樣本處理及要求

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鍾,離心20分鍾左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉澱,應再次離心。

2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鍾後,離心20分鍾左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉澱形成,應該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鍾左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鍾左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反複凍融,以使細胞破壞並放出細胞內成份。離心20分鍾左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。

5. 組織標本:切割標本後,稱取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鍾左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。分裝後一份待檢測,其餘冷凍備用。

6. 標本采集後盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放於-20℃保存,但應避免反複凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑製辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然後在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然後從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻後從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻後從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋後各孔加樣量都為50μl,濃度分別為48pmol/L32pmol/L 16pmol/L8pmol/L 4pmol/L

2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其餘各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然後再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加於酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.         溫育:用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。

4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋後備用。

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩幹,每孔加滿洗滌液,靜置30秒後棄去,如此重複5次,拍幹。

6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7.         溫育:操作同3

8.         洗滌:操作同5

9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鍾.

10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液後15分鍾以內進行。

注意事項:

1.  試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後方可使用,酶標包被板開封後如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.  濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.  各步加樣均應使用加樣器,並經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間較好控製在5分鍾內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4.  請每次測定的同時做標準曲線,較好做複孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大於標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測定,計算時請最後乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5.  封板膜隻限一次性使用,以避免交叉汙染。

6.  底物請避光保存。

7.  嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.  所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.  本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

計算:

以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,   

在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD     

值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋     

倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標     

準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD     

代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋     

倍數,即為樣品的實際濃度。

試劑盒性能:

1.樣品線性回歸與預期濃度相關係數R值為0.990以上。

2.批內與批見應分別小於9%11%

保存條件及有效期:

1.試劑盒保存:2-8

2.有效期:6個月

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