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RT-PCR技術服務
RT-PCR技術服務
更新時間:2020-12-08
訪問量: 1168
廠商性質: 生產廠家

RT-PCR技術服務
1、引物設計合成(人、大鼠、小鼠、兔等)
2、基因表達水平檢測、內參檢測
3、SNP檢測服務
4、甲基化檢測服務
5、測序技術服務
6、芯片檢測(全基因、MicroRNA)
7、染色體分析

RT-PCR技術服務產品概述:

反轉錄PCR(Reverse transcriptase PCR,RT-PCR)是一種從RNA擴增cDNA拷貝的方法。RT-PCR對於獲得與克隆mRNA的5’、3’末端序列和從非常少量的mRNA樣品構建大容量的cDNA文庫方麵都是極為靈敏與通用的方法。此外,RT-PCR還易於鑒定已轉錄序列是否發生突變及呈現多態性,還可用於測定基因表達的強度。我公司采用二步RT-PCR法,可滿足客戶不同的實驗要求。
樣品要求:提供的樣品要新鮮並盡可能多,不推薦提供RNA樣品,或者提供cDNA,並盡可能詳細的提供背景資料(基因序列、Genebank accession number擴增產物的用途等)。


RT-PCR技術服務基本步驟:
● 模板製備:見RNA提取技術服務。
● 引物設計
    客戶提供上、下遊引物,或者我公司提供免費的引物設計及合成(包括RT-PCR半定量檢測中的內參引物)。
● 反轉錄
(1)Microtube管中配製下列模板RNA/引物混合液,全量<15 μl。

 

 試劑名稱 使用量
 模板RNA 2μg
 Oligo(dT)12-18 Primer(50μM) 2.5μl

(2)70℃保溫5分鍾後迅速在冰上急冷2分鍾以上。 
(3)離心數秒鍾使模板RNA/引物的變性溶液聚集於Microtube管底部。 
(4)在上述Microtube管中配製下列反轉錄反應液。

 

 試劑名稱 使用量
 上述模板RNA/引物變性溶液 
 5×M-MLV Buffer 5μl
 dNTP Mixture(各10 mM) 1.25μl
 RNase Inhibitor(40 U/μl ) 25U
 M-MLV(200 U/μl ) 200U 
 RNase free dH2O up to 25μl

42℃保溫1小時。 
(5)70℃保溫15分鍾後冰上冷卻,得到cDNA溶液。
若需要表達,參考基因表達服務。若需要進行RT-PCR半定量分析,接著以下的操作。
● RT-PCR半定量分析
PCR擴增目的基因及看家基因,產物經過瓊脂糖凝膠電泳後進行灰度掃描分析。

RNA模板的製備需另收費(見RNA提取服務)以上為1個目的基因的報價。進行相對定量分析時,同一材料的多個目的基因的價格=1個目的基因價格×目的基因個數。
提供結果
完整的實驗操作步驟、電泳圖、定量分析結果等。

RT-PCR技術服務參照:

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