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植物類黃酮(Flavonoids) ELISA檢測試劑盒說明書

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詳細介紹

植物(Plant)類黃酮(Flavonoids)

ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被的微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育並徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的類黃酮(Flavonoids)正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑製劑。

2.  標本采集後盡早進行提取,提取按相關文獻進行。

3.  植物萃取液或其它相關樣本:請1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測。

4.  保存:如果樣本收集後不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存於-20℃,避免反複凍融,在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

  • 酶標儀(450nm)
  • 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
  • 37℃恒溫箱

操作注意事項

  1.   試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鍾。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬於正常現象,水浴加熱使結晶完全溶解後再使用。
  2.   實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫幹燥)保存。
  3.   濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍,最終結果乘以5才是樣本實際濃度。
  4.   嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
  5.   所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標板

12孔×8條

12孔×4條

標準品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩衝液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、1.25、2.5、5、10、20 mg/L

試劑的準備

 20×洗滌緩衝液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩衝液加19份的蒸餾水。

洗板方法

  1.   手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min後甩盡孔內液體,在吸水紙上拍幹,如此洗板5次。
  2.   自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步驟

  1.   從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條,剩餘板條用自封袋密封放回4℃。
  2.   設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
  3.   樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。
  4.   除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5.   棄去液體,吸水紙上拍幹,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍幹,如此重複洗板5次(也可用洗板機洗板)。
  6.   每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7.   每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

結果判斷

 繪製標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪製出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

 

實驗代做服務:

 

免疫組化IHC染色實驗服務

細胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務

試劑盒免費代檢測

實驗室代做實驗項目

 

透射電鏡服務實驗服務

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區嗜銀-AGNOR染色實驗服務

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雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

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多因子液相芯片技術(Luminex)實驗

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