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PCR產物純化回收試劑盒
點擊次數:152 發布時間:2020-10-27

PCR產物純化回收試劑盒

quick Midi Purification Kit

 

產品信息:

試劑盒組成              保存   DH102-01    100 次             DH102-02     200


結合BB                     室溫              60ml                                    100ml

                                                     25ml                                    25ml×2

 漂洗WB                   

                           第--次使用前按說明加指定量乙醇 

洗脫緩衝液EB

室溫

15ml

10ml×2

吸附柱EC

室溫

100

200

收集管(2ml

室溫

100

200

 

保存條件:本試劑盒在室溫儲存12 個月不影響使用效果。

產品介紹:

在高離序鹽存在的情況下,DNA *&片斷選擇性的吸附於離心柱內的矽基質膜上,再通過一係列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將引物、核苷酸、蛋白、酶等雜質去除,最後低鹽、高 pH 值的洗脫緩衝液將純淨 DNA 從矽基質膜上洗脫。

產品特點:

1. 離心吸附柱內矽基質膜全部采用進口特製吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重複性好。克服了國產試劑盒膜質量不穩定的弊端。

2. 使用了優質結合液,不含傳統結合液的碘化鈉和高氯酸鹽,不抑製回收後酶切、連接克隆等下遊反應。

3. 結合液調製成為了黃顏色,便於監測 pH 值變化從而達到z理想結合效果,大大提高回收效率。

4. 簡單快速、使用方便。

注意事項:

1. 所有的溶液應該是澄清的,如果環境溫度低時溶液可能形成沉澱,此時不應該直接使用,可在 37℃水浴加熱幾分鍾,即可恢複澄清,使用前應該恢複到室溫.

2. 儲存於低溫(4℃或者-20℃)會造成溶液沉澱,影響使用效果。

3. 避免試劑長時間暴露於空氣中產生揮發、氧化、pH 值變化,各溶液使用後應及時蓋緊蓋子。

4. 結合液中含有刺激性化合物,操作時要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時,要立即用大量清水或者生理鹽水衝洗。

5. 回收純化的 DNA   **片段一般在 100bp 40kb 之間,過長、過短片段的回收效率迅速降低。

6. 回收 DNA 的量和起始 DNA 的量,洗脫體積,DNA *&片斷大小有關。一般 1-20μg100bp-5kb DNA **片段,回收率可達 95%

7. pH ≤7.5 時,吸附膜吸附 DNA 的效率最G。如果待純化產物含有堿性物質過多,造成和結合液混和後pH 偏高,會導致回收率降低。混和後,如果結合液依舊保持黃色,說明 pH 正常;如果變成橘紅色或者淡紫色,說明 pH 偏高,可加 5-10μl 3M 醋酸鈉pH5.2pH 值調到 5-7(黃色

  • 洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA, 不影響下遊酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫, 但應該確保 pH 大於 7.5pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫,DNA *&片段應該保存在-20℃。DNA &* 片段如果需要長期保存,可以用 TE 緩衝液洗脫10mM Tris-HCl1mM EDTApH 8.0,但是 EDTA 可能影響下遊酶切反應,使用時可以適當稀釋。
  •  
  • 自備試劑:無水乙醇操作步驟:

提示:第--次使用前請先在漂洗液 WB 中加入指定量無水乙醇,加入後請及時打鉤標記已加入乙醇,以免多次加入!

1. 100μl PCR 擴增後體係或者酶切後體係加入 500μl 結合液 BB,充分混勻。如果初始體係小於 100μl,請事先用雙蒸水調整至100μl

2. 將上一步所得溶液加入吸附柱 EC 中(吸附柱放入收集管中,室溫放置 1min12,000rpm 離心 30-60sec,倒掉收集管中的廢液。

3. 加入 500μl 漂洗液 WB(請先檢查是否已加入無水乙醇!12,000rpm  離心 30sec,棄掉廢液。

4. 重複操作步驟 3

 

5. 將吸附柱 EC 放回空收集管中,12,000rpm 離心 2min,盡量除去漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑製下遊反應。

6. 取出吸附柱 EC,放入一個幹淨的離心管中,室溫放置數分鍾。

7. 在吸附膜的中間部位滴加洗脫緩衝液 EB洗脫緩衝液事先在 65-70℃水浴中加熱效果更好,室溫放置 2min12,000rpm  離心1min。如果需要較多量 DNA,可將得到的溶液重新加入吸附柱中,離心 1min(注意:洗脫體積越大,洗脫效率越高。如果需要DNA 濃度較高,可以適當減少洗脫體積, 但是最小體積不應少於 30μl,體積過小降 DNA 洗脫效率,減少產量。)

 

 

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